Efficacy of calcein and Coomassie Blue dyeing of shell growing-edges and micro growth-bands: Ageing juvenile of Pinctada mazatlanica (Pterioida: Pteriidae) / Eficiencia de la tinción de bandas de crecimiento con calceina y azul de coomassie, para estimar la edad de jóvenes de Pinctada mazatlanica (Pterioida: Pteriidae)

Age validation is the first step to determine shellfish species age determination. This information is vital for different inferential models used in marine ecosystem management activities. In spite that various validation techniques are used for marking carbon calcium structures, the calcein marking technique for oysters had never been used for age validation in Pinctada mazatlanica. Thus the objectives of this study included: the evaluation of calcein to mark a shell growing-edge, and the efficacy of Coomassie Blue staining on posterior shell growth, to produce visible micro growth-bands that would enable age validation of juvenile mother-of- pearl oysters. Oysters were collected and cultivated at The Perlas del Cortez S. de R. L. MI. pearl-farming opera tion, in Pichilingue, La Paz Bay, Baja California Sur, Mexico; a total of 36 oysters (shell height 11.5-36.4mm) were injected with calcein (0.125g/L), and another 50 oysters (shell height 14.8-42.7mm) were submersed in calcein (0.4 and 0.7g/L). Shell slices of calcein-marked oysters were posteriourly stained with Coomassie Blue R-25 for micro growth-band recognition. Our results showed that Calcein marking only worked by submersion and produced a concise bright lime-green florescent band along the growing-edge with clear boundaries for both concentrations. However, marks resulted better at the lower calcein concentration (0.4g/L) with more “perfect” and “good” marks on the growing-edge (p=0.0012). Commassie Blue staining technique was successful, and allowed to conclude that one micro growth-band was laid down per day, similar to other oyster species. Mean 15-d increment of shell growth height was slightly greater at the lower calcein concentration ( =0.735mm) than at the higher one ( =0.577mm) (not significant difference, p=0.198). Calcein marking of shell growing- edges and Commassie Blue staining of posterior shell growth, as a method for age validation is recommended for shellfish shell growth-band counts. This will allow back-dating for estimation of very precise colonization dates, both spatially and temporally in future work.

La validación de la edad es el primer paso para determinar las edades de las especies de moluscos, esta información es de vital importancia para los diferentes modelos de inferencia utilizados en actividades de gestión de los ecosistemas marinos. Diversas técnicas de valida- ción se utilizan para marcar estructuras de carbonato de calcio, aunque la técnica de marcado de calceína en ostras nunca se había utilizado para la validación de la edad de P. mazatlanica. Los objetivos de este estudio fueron: evaluar la calceína como marcador interno de la concha y la eficiencia del azul de Coomassie en la tinción de la matriz proteica de la concha, para facilitar la observación y conteo de micro bandas de crecimiento que permiten validar la edad de las ostras juveniles de madre perla. Las ostras fue- ron recolectadas en la costa de la empresa Perlas del Cortez S. de RL MI., en Pichilingue en Bahía de La Paz, Baja California Sur, México. Se inyectaron 36 ostras (altura de concha 11.5-36.4mm) (0.125g/L de calceína) y otras 50 ostras (altura de la concha 14.8-42.7mm) se sumergieron (0.4 y 0.7g/L de calceína). Secciones de la concha marcadas con calceína fueron teñidos con azul de Coomassie R-25 para el reconocimiento de las micro bandas de crecimiento. El marcado con calceína fue exitoso por inmersión y produjo una banda fluorescente de color verde lima brillante con- cisa a lo largo del crecimiento interno de la concha. Sin embargo, las marcas fueron mejores a una concentración de calceína inferior (0.4g/L), con mayor cantidad de marcas “buenas” y “perfectas” (p=0.0012). La técnica de tinción con azul de Commassie también fue exitosa. Se detectó un crecimiento diario por micro banda, similar a lo encontrado en otras especies de ostras. La diferencia del crecimiento medio en relación a la altura de la concha en un lapso de 15 días, fue ligeramente mayor con una concentración de calceína inferior ( =0.735mm) que con la de mayor concentración ( =0.577mm), pero no significativamente (p=0.198). El marcado de conchas con calceína y tinción de matrices proteicas con azul de Coomassie posterior a su crecimiento, es recomendando como un método para la validación de la edad facilitando el conteo de micro bandas de crecimiento internas de la concha. Además, permitirá estimar edades con el fin de predecir fechas de colonización y ubicación de bancos naturales.

Crecimiento y mortalidad de la madreperla Pinctada mazatlanica en poblaciones naturales del litoral oriental de Baja California Sur, México

Growth and mortality of the mother-of-pearl Pinctada mazatlanica in natural populations of the east coast of Baja California Sur, Mexico. The Mexican Pacific mother-of-pearl Pinctada mazatlanica was placed in forbidden fisheries status for the Mexican Federal Government and considered in extinction danger since 1939. This decree was modified in 1994 to allow the capture of spat for research or marine culture. We estimated the growth and mortality of mother-of-pearl from the eastern littoral of South Baja California wild stock in the periods 1992-93 and 1997-99. We used 38 sample stations at 2 bays and 6 insular complexes. The maximum length was 187.22 mm (179.83-195.81 mm, P > 0.95). Seasonal von Bertalanffy growth (ELEFAN I routine) values are: = 193.31 mm, k = 0.54 year-1, t0 = -0.1805 year, C = 0.49 and WP = 0.75. The growth performance index was ’ = 4.305. The total mortality was calculated from a length-converted catch curve Z = 2.03 año-1. Length-weight relationship W(i) = 0.0005418 * L(i)2.7301. The growth parameters were similar to those for Pinctada margaritifera var. cumingi (open ocean wild stocks). The wild stock oysters differ from culture individuals at experimental repopulation conditions in Paz Bay. The total mortality is similar to that for Pinctada radiata in the Red Sea. Rev. Biol. Trop. 57 (1-2): 53-61. Epub 2009 June 30.

La madreperla Pinctada mazatlanica esta en veda desde 1939 y considerada en peligro de extinción, cambiando su categoría a protección especial en 1994. El presente estudio estima su crecimiento y mortalidad en bancos naturales en el periodo 1992-93 y 1997-99. Se registró el alto de la concha de ostras en poblaciones desde el paralelo 28º a 23º LN del litoral oriental de Baja California Sur, abarcando 38 estaciones, 2 bahías y 6 islas. La longitud máxima estimada fue 187.22mm (179.83-195.81mm, P > 0.95). Las frecuencias de longitud se ordenaron en un "año virtual". Los parámetros de crecimiento de von Bertalanffy estimados con el programa ELEFAN I fueron: o = 193.31mm, k=0.54año-1, t0= -0.1805 años, C=0.49 y WP=0.75; el índice de desempeño del crecimiento fue’=4.305. La mortalidad total fue de Z=2.03 año-1 por longitud convertida a curva de captura. La regresión peso total y la altura tuvo la expresión W(i)=0.0005418 * L(i)2.7301. Los parámetros de crecimiento fueron similares a los de Pinctada margaritifera de bancos de mar abierto y diferentes a aquellos de ostras perleras en repoblamiento en bahía de La Paz. La mortalidad mostró valores parecidos a los estimados para Pinctada radiata del Mar Rojo.